PCR实验室又被称为遗传基因扩增实验室,特点是能把少量的DNA大幅上升,PCR是生物学研究与实验的基本方式,广泛用于分子生物学各行各业。比如:hlv、乙肝、禽病疫、癌基因的检查和确诊,DNA指纹、个体识别、dna鉴定及法医物证、动植物检疫,小动物以及衍生品检验,饲料原料、护肤品、食品类卫生检测,转基因作物与转基因食品微生物检验等。
本文从PCR实(shi)验室合(he)理布局、工作中区域的重要功能和设备配置、实(shi)验室的排风系统(tong)及压(ya)力控制、装(zhuang)饰装(zhuang)修材(cai)料规定及其(qi)它常(chang)见问题来讲解(jie)。
一、PCR实验室合理布局
正常情况下分成四个区域:试剂提前准备区、试品制备区、扩增区和扩增物质分析区。
PCR实验室正常情况下为试剂提前准备区、试品制备区、扩增区和扩增物质分析区四个独立的工作中区域并配有专用型过道,各工作中区域需设缓冲间,工作区域与缓冲间宜组装连锁加盟设备。不一样的功能工作区域应该是隔开独立,各工作区域有明显标示,不可以直达,假如紧密结合,需组装物件传递窗。
PCR实验室区域设置并不是一成不变的,以下这些状况必须表明:
1.假如样版在扩增前需要破碎解决,就需要增加一个区域用以样品破碎。
2.如果使用实时荧光PCR法,则扩增区和分析区能够合并为一个区。
3.如果使用全自动PCR检测仪,则样本制备区、扩增区和分析区能够合并为一个区。
前两区为扩增后区,后两区为扩增后区,扩增后区与扩增后区应严苛分离。实验材料、试剂、记录纸、笔、清理材料及,需要从扩增后区流入扩增后区,也就是从试剂提前准备区、试品制备区到扩增区和扩增物质分析区,不可反向流动性。实验室的气旋也应从扩增后区流入扩增后区,不可反向流动性。各工作区域顶端应组装紫外线灯,紫外线灯的光波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外线灯。
二、实验室各个区作用及关键设备
正常情况下的四大区域留意正压力负压力的控制。
1.试剂提前准备区:
关键开展试剂的制备、分开包装和主反应混合物的制备。试剂和用以试品制作出来的原材料应立即运输至该区域,不可通过其他区域。试剂原料务必存储在本区内,并且在本区内制备成所需要的试剂。本区关键设备有天平秤、电冰箱、离心脱水机、加样器、震荡器等。
针对气旋的压力操纵,本区并没高的要求。
2.试品制备区:
关键开展样品储存、核苷酸(RNA、DNA)获取、存储以及添加至扩增反应管和检测DNA的生成。本区关键设备有电冰箱、超净工作台、离心脱水机、加样器、震荡器、恒温水浴槽等。
本区的渗透压力要求为:相较于相邻区域为正压力,以防止从相邻区进到本区的大气气溶胶环境污染。
3.扩增区:
该区域功能的是DNA扩增和扩增精彩片段的测量。除此之外,反映混合物(来源于试剂存储和制备区)制备成反映混合物和已制备的DNA模版(来源于样本制备区)的加持等还可在本区中进行。针对气旋的压力操纵,相较于相邻区域为负压力,以防止大气气溶胶从本区漏出来。为防止大气气溶胶所引起的环境污染,应尽量避免在本区内不必要行走。某些实际操作亦或者样等需在超净工作台中进行。
该区域的机器通常是核苷酸扩增热力循环仪、加样器、超净工作台等。在其中热力循环仪的开关电源应专用型,并配置一个可调稳压电源或UPS,以避免因为工作电压的变化对扩增测量影响的关键开展DNA扩增。
本区的渗透压力要求为:相较于相邻区域为负压力,以防止大气气溶胶从本区漏出来。
4.扩增物质分析区:
扩增产物的测量。本区关键设备有酶标仪、洗板机、加样器和沙浴箱等。
本区的压力差的要求为:相较于相邻区域为负压力,以防止扩增物质从本区蔓延至其他区域。
三、PCR实验室排风系统及压力控制
四大区域应产生单边流线型、应采用全送全排。
各区域中间需具备单边的试验加工工艺流、货运物流、人流量与气旋,产生单边步骤保护的天然屏障,防止试验间的互相影响,避免大气气溶胶蔓延对实验步骤导致环境污染。
PCR实验室并没严格净化处理规定,可是为防止每个试验区域交叉污染的概率,应采用全送全排的自然通风方式,严格把控送、排风系统比例以确保各试验区工作压力规定。
此外,PCR实验室内一般有超净工作台、通风橱等生产线设备,这种机器设备风量大而使用时长有间隔性,并不和空调机组使用时间一致,这就使得有这些机器设备房间在设备起停的时候特别非常容易过压,本来正常渗透压力一下子就破坏。这便是PCR实验室空调机组定制的难题所属。
四、PCR实验室装修设计
原材料规定:实验室排架结构应坚固、密封性好。全部阳角线应采用弧形衔接,墙面内腔光滑、不积灰、抗腐蚀、易清洁消毒。路面应用PVC卷材或环氧树脂胶自流坪,原材料应达到无间隙、没有渗漏、光滑、抗腐蚀的需求。
五、PCR实验室常见问题
试品制备区室内空间会大些:
1.好多个区域大小设定状况,试剂提前准备区、扩增区、扩增物质分析区,室内空间能够相对性小一些,试品制备区域置放超净工作台和低温箱,室内空间应大一些。
2.试剂提前准备区、试品制备区设紧急洗眼器,以确保作业人员的安全性。
3.PCR实验室并没有严格净化处理规定,也可以根据应用情况和资金投入挑选。